Анализ крови ПЦР

Плюсы и минусы ПЦР

К неоспоримым преимуществам метода полимеразной цепной реакции относятся следующие аспекты:

  • Точность. Диагностические приемы, на которые опиралась медицина до начала эпохи ПЦР, зачастую основывались на косвенном определении возбудителей болезни: в ходе анализа искались антитела к ним, признаки их присутствия, продукты их жизнедеятельности. ПЦР же узнает конкретный микроорганизм «в лицо», обнаруживает его ДНК или РНК, следовательно, появляется возможность выбрать максимально эффективную тактику лечения;
  • Надежность. По этому параметру ПЦР-диагностика далеко опережает конкурентов и приближается к 100%. Правильнее будет сказать так: если условия подготовки, забора, транспортировки, проведения анализа и оценки итогов были соблюдены неукоснительно, никакой ошибки быть не может. Ложноотрицательный результат возможен только в случае некорректно взятого материала, а ложноположительный – в случае попадания посторонних примесей в образец на любом из этапов исследования;
  • Чувствительность. Методика ПЦР уникальна еще и тем, что позволяет обнаружить инфекционного агента в пробе, даже если там содержится всего одна молекула его ДНК. Это открывает широкие возможности по своевременной диагностике заболеваний или даже предотвращению их развития, если возбудитель еще не размножился и не активизировался в организме человека. Кроме того, ПЦР-анализ может определить так называемую вирусную нагрузку – вычислить примерное количество копий вируса в крови и дать ответ, насколько тяжело течение болезни, вероятен ли ее рецидив в случае ремиссии, существует ли риск ее передачи другим людям;
  • Универсальность. Можно сдать ПЦР-анализ всего один раз и получить ответ, имеются ли у вас какие-либо инфекции из целого списка вероятных диагнозов. Особенно это актуально в случае с заболеваниями, передающимися половым путем – они нередко соседствуют друг с другом. Загрузив образец биоматериала пациента в амплификатор и добавив в пробирку праймеры сразу нескольких возбудителей, специалист сможет обнаружить присутствие каждого из них;
  • Скорость. Как мы уже рассказали выше, весь цикл ПЦР-диагностики занимает по времени не более 2-3 часов. Разумеется, нужно сделать поправку на загруженность лаборатории и процесс сбора биоматериала, но большинство современных диагностических центров предоставляют своим пациентам готовые результаты анализа ПЦР в день обращения или на следующие сутки.

Как ни странно, недостатки у полимеразной цепной реакции тоже есть:

  • Очень высокие требования к чистоте образца. Попадание в пробу посторонних примесей на любом из этапов диагностики грозит получением ложноположительного результата. А микробов вокруг человека миллионы, они содержатся практически везде;
  • Вероятность амплификации ДНК мертвых микроорганизмов. Бывает так, что человек уже переболел, а молекулы погибшего возбудителя все еще присутствуют в его организме, прибор определяет их и также дает ложноположительный ответ;
  • Проблема неопознанных инфекций и мутаций. Теоретически может быть так, что в образце будут присутствовать такие микробы, для которых вообще еще не разработаны праймеры, или они существуют, но по какой-то причине не были включены в реакцию. Кроме того, возбудители инфекций постоянно мутируют, приспосабливаясь к меняющимся условиям и новым лекарствам. Соответственно, уже имеющиеся праймеры теряют актуальность, потому что перестают соответствовать своему прототипу.

Подготовка к анализам

Сделать анализ крови либо сдать мазок на ИППП у мужчин и женщин бесплатно можно в государственном медучреждении поликлинического типа, специализированной клинике, либо на платной основе в частной медицинской лаборатории. В последнем случае он, по желанию, может быть проведен анонимно.

Перед тем, как сдавать пробу в виде соскоба слизи, пациентам обоего пола необходимо в течение 1-2 дней воздерживаться от сексуальных контактов и в течение 2-3 часов до нее не мочиться и не проводить гигиенической обработки области промежности. Кроме того, существует и гендерная специфика. Мазок на ИППП у женщин не сдается во время менструации. Мазок на ИППП у мужчин из уретры берется при помощи специальной щеточки и представляет собой не слишком приятную, но быструю процедуру.

Какой-либо специальной подготовки перед сдачей кровяных проб на ЗППП не проводится, тем не менее для большей чистоты результатов необходимо соблюдать определенные правила:

  1. Забор биоматериала проводится в утренние часы на голодный желудок. Исключается не только употребление какой-либо пищи, но и питье, за исключением небольшого количества обычной (негазированной и не минеральной) воды.
  2. За сутки за предстоящей процедуры необходимо отказаться от курения, употребления алкогольных напитков любого вида и в любом количестве, а также исключить из рациона острые, консервированные, соленые и копченые продукты.
  3. Также за 24 часа до нее нужно прекратить прием антибиотиков, а лучше – любых лекарственных препаратов. При невозможности отказаться от их приема в силу медицинских показаний, следует обязательно проинформировать врача о том, какие именно препараты, когда и в какой дозировке были приняты.
  4. Накануне процедуры желательно избегать значительных физических нагрузок.

Приходить в медучреждение с целью проведения процедуры желательно хорошо отдохнувшим, в состоянии эмоционального покоя. Не рекомендуется сдавать биоматериал в остром периоде ОРВИ или других патологий как инфекционного, так и неинфекционного характера.

ПЦР диагностика – что это

ПЦР диагностика использует методы, которым доступно выявлять РНК и ДНК (нуклеиновые кислоты) организмов, находящихся в любом биологическом материале человеческого организма: крови, моче, тканях, слизи, слюне, мокроте и прочем.

Выбор забора биологического материала для целей лабораторных исследований остается за лечащим врачом. Правильная расшифровка результатов от которого и зависит для постановки диагноза и будущего лечения также лежит на плечах врача. Пользуется успехом, например, ПЦР анализ крови.

При диагностировании специализированный медик с опытом практики выявляет предполагаемую информативную среду обитания тех либо иных вредоносных организмов. Стоимость диагностирования ПЦР способом в каждой лаборатории либо исследовательском центре разнится.

Методом диагностики ПЦР выявляются не просто ДНК либо РНК генетического инфекционного генома, но и распознаются индивидуальные характерные признаки, присущие определенному типу микроорганизмов.

Восстановить картину для исследования методике удается с помощью полимеразной цепной реакции, то есть многократного копирования и размножения субъекта вне человеческого организма в лабораторных условиях. Стоит разобраться, как же это такое размножение помогает выявить заболевания на ранних этапах развития.

Так каждый микроорганизм наделен генетической информацией (это ДНК) вне зависимости от размеров. Основное правило генетики говорит о комплементарности. Другими словами, ДНК состоит из 4-х нуклеотидов, а соседствующие спирали воссоединяются в определенном биологией порядке, и никак не иначе. Дабы выявить ДНК определенного биологического создания, достаточно получить небольшой фрагмент, так называемое хранилище основополагающей генетической информации для исследования.

Стоит отметить, что некоторые подвиды организмов могут хранить генетический код информации в иного рода нуклеиновой кислоте (РНК), как, например, это иммунодефицит организма человека. Методика ПЦР отыскивает и это.

Фрагменты такого типа и выявляются рассматриваемой уникальной методикой ПЦР, где принцип деятельности основан на обнаружении отдельного микроорганизма. Для каждого исследуемого чужеродного организма создан в практике генетический специфический детектор, который отыскивает «родственный» фрагмент РНК либо ДНК, запуская деятельность воссоздания и размножения его копий в огромном количестве.

Всего на протяжении нескольких минут в лабораторных условиях допустимо получить многомиллиардное количество отысканной вредоносной молекулы. Таким образом, определяется тип возбудителя инфекций конкретного заболевания.

Анализ методом ПЦР

ПЦР анализ – что это такое? Это метод использует принципы молекулярной биологии. Для исследования материала применяются особые ферменты, которые многократно и быстро копируют ДНК, РНК фрагменты возбудителей болезни. Существует разные виды ПЦР анализа в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, кал и т.д.). После обработки сотрудники лаборатории сравнивают с базой данных полученный результат, выявляют концентрацию, тип возбудителя.

Анализ на ПЦР помещают в специальный амплификатор (прибор), который нагревает и охлаждает пробирки с биоматериалом. Изменения температуры нужны для репликации фрагментов. Точность результата будет зависеть от точности температурного режима. Метод полимеразной цепной реакции помогает выявить:

  • инфекционный мононуклеоз;
  • ВИЧ;
  • цитомегаловирусную инфекцию;
  • вирусные гепатиты G, C, B, A;
  • инфекции/заболевания, передающиеся половым путем (ИППП/ЗППП): гарднереллез, трихомониаз, уреаплазмоз;
  • герпетическую инфекцию;
  • онкогенные вирусы;
  • листериоз;
  • хеликобактерную инфекцию;
  • клещевой энцефалит, боррелиоз;
  • туберкулез;
  • кандидоз.

Крови

На данный момент из-за новизны технологии анализ крови методом ПЦР все еще имеет высокую цену. Для подготовки биоматериала не нужно соблюдать определенные требования. Даже вызванные физическими нагрузками, стрессами, сменой рациона питания изменения состава не влияют на результат исследования. ПЦР анализ крови может испортить только прием антибактериальных средств, поэтому перед сдачей необходимо выдержать паузу между лечением и тестом.

ПЦР исследование крови – самый распространенный вариант диагностики хронических, острых инфекционных патологий при вирусном или атипичном проявлении. Серологические методы исследования имеют определенную трудность при проведении – определение наличия возбудителя проводится по наличию антител в организме человека. Результат мог быть ложноотрицательным, если состояние больного не давало время для их выработки.

Мазка

В сфере гинекологии для исследования наличия инфекционных микроорганизмов используют ПЦР анализ мазка. Работа с материалом проводится по тому же принципу, что и с кровью: многократное увеличение фрагментов ДНК возбудителя, чтобы с легкостью его идентифицировать. Это же помогает обнаружить скрытые инфекции у женщины. Для проведения анализа могут быть взяты разные биологические жидкости: слюна, мокрота, моча, кровь. В гинекологии для точности определения чаще используется мазок со слизистой влагалища из цервикального канала.

Для проведения ПЦР существуют определенные показания. Нередко его нужно сделать, чтобы выявить устойчивый к антибиотикам вид возбудителя. У женщин основными показаниями для диагностики по этому методу выступают:

  • беременность, которая протекает тяжело;
  • острая фаза ИППП;
  • если есть подозрение на переход ИППП в хроническую стадию;
  • поиск причин бесплодия.

Кала­

Для выявления инфекции может быть назначен со стороны врача анализ кала на ПЦР. Для того, чтобы получить максимально достоверные результаты после теста, необходимо придерживаться следующих правил перед забором биоматериала:

  • за несколько суток прекратить прием слабительных препаратов: масла, свечи;
  • исключить медикаменты, которые дают специфическую окраску калу, к примеру, с содержанием железа.

Для забора следует использовать стерильную палочку и контейнер. Чем-либо их дополнительно протирать, ополаскивать не нужно. При сборе материала будьте осторожны, вы не должны задеть рукой внутренние стенки контейнера. Следите, чтобы в кале не было примесей мочи, нельзя использовать дополнительные вспомогательные средства для испражнения (клизма). Собирать материал нужно в день сдачи, хватит 1/3 объема контейнера. Данный метод диагностики имеет следующие преимущества:

  1. Анализ способен указывать на ДНК паразита, другие же тесты могут определять только остатки их жизнедеятельности.
  2. Высокая точность, будет установлен возбудитель.
  3. Ультрачувствительный анализ, который способен выявить даже одну клетку вируса.
  4. Результат исследования ПЦР будет готов через 4-5 часов.

Мочи

При необходимости для проведения теста врач может взять для исследования мочу. Высокая точность открывает возможность работать с любой биологической жидкостью, из которой удается извлечь ДНК вируса. Чтобы сдать анализ мочи ПЦР, нужно придерживаться таких ограничений перед забором материала:

  • минимум за 1 день до процедуры прекратить половые контакты;
  • за 3 недели до сдачи должно быть окончено любое антибактериальное лечение, потому что медикаменты смажут картину;
  • сдавать анализ нужно натощак (жидкость тоже запрещена);
  • брать нужно первую утреннюю порцию материала.

Диагностика методом ПЦР – выявление и диагностирование

Метод ПЦР – это такое исследование, которое выявляет фактически весь спектр возбудителей вирусного и бактериального характера. Полимеразная реакция, как диагностика заболеваний у мужчин, женщин и детей, показывает результаты исследований в различных областях медицины: гинекологии, урологии, терапии и так далее.

В частности, при сдаче крови идентифицируют такие заболевания:

  • гепатиты вирусного характера: А, В, С и D, ТТ – сдается кровь;
  • цитомегаловирус;
  • ВИЧ;
  • вирусы герпеса (обнаруживаются не только у мужчин и женщин, но и у детей соскоб показывает результат);
  • опоясывающий лишай;
  • инфекция энтеровирусная;
  • токсоплазмоз;
  • краснуху;
  • коклюш;
  • листериоз (сдается соскоб тканей лимфоузлов, кровь, околоплодные воды и т.д.) и прочее.

Стоит отметить, что цитомегаловирус является бессимптомным заболеванием. То есть человек со здоровой иммунной системой может носить в организме цитомегаловирус без знания проблемы заболевания. Цитомегаловирус наделен 60-тидневным инкубационным периодом. Запущенная форма болезни опасна для мужчин, при беременности, и порождает, как цепная реакция, энцефалит, пневмонию и прочие заболевания.

Методика ПЦР выявляет коклюш – острое инфекционное заболевание дыхательных путей (верхних), опасное так же при беременности, для детей и мужчин. Коклюш передается воздушно-капельным путем. Фактически 90% людей при контакте с больным, должны сдать анализ на коклюш, поскольку инфекция отличается повышенной контагиозностью.

При беременности коклюш может вызвать асфиксию плода. У мужчин, детей, женщин при беременности коклюш в запущенном виде поражает, как цепная реакция, сердечно сосудистую систему, легкие, бронхи. Чтобы обнаружить коклюш для исследования у мужчин, женщин и деток, берется соскоб либо мазок полости рта, кровь из вены/пальца, мокрота и моча.

Кроме крови ПЦР исследует иного рода биоматериалы: фрагменты мочи, соскоб, мазки, слюну у мужчин, детей, женщин и обязательно при беременности околоплодные воды по назначению врача, ведь стоимость исследования не мала. Частные лаборатории устанавливают собственную стоимость на производимые анализы.

Диагностика типового плана крайне важна, поэтому стоимость играет меньшую роль в определении заболевания. При получении ложноотрицательных результатов с лаборатории расшифровка их уже не важна, а болезнь может быть не идентифицирована и запущена цепная реакция инфецирования всего организма.

Виды ПЦР

К сегодняшнему дню на вооружении медицины появилось более десятка различных видов полимеразной цепной реакции: рекомбиназная, вложенная, инвертированная, ассиметричная, ступенчатая, групп-специфическая, с обратной транскрипцией, с «горячим стартом» и так далее – все они разработаны с учетом конкретных диагностических требований. Человеку несведущему в молекулярной биологии было бы сложно, да и скучно разбираться в тонкостях этой типологии. По настоящему интересны те виды ПЦР, которые широко используются на практике и активно предлагаются пациентам. Вот об этих анализах давайте и поговорим подробнее.

ПЦР 12

Рекордсменом по популярности заслуженно выступает так называемый комплексный анализ ПЦР 12 – он называется так потому, что включает в себя 12 наиболее распространенных половых инфекций, а также контрольный тест на качество взятых материалов (КВМ).

Почему этот вид диагностики так актуален? Во-первых, потому что он соответствует печальным реалиям нынешнего времени, когда у одного пациента кожно-венерологического профиля обнаруживается целый «букет» нехороших болячек. Во-вторых, потому что лабораториям проще пользоваться готовым картриджем, который содержит сразу все необходимые праймеры. В-третьих, это выгоднее для самого пациента, поскольку комплексный анализ обойдется дешевле, чем обследование на наличие каждой ИППП по отдельности.

Как сдают анализ ПЦР 12? У мужчин берут мазок из уретры. Это не очень приятная, но вполне терпимая и быстрая манипуляция. У женщин берут эпителиальный соскоб из влагалища или с шейки матки. Эта процедура, как правило, не вызывает болезненных ощущений. О правилах подготовки к визиту в лабораторию читайте ниже.

Стандартный набор ПЦР 12 выглядит следующим образом:

  • Вирусы герпеса 1 и 2 типа;
  • Папилломовирусы 16 и 18 типа (онкогенные);
  • Микоплазмы двух типов – человеческая и генитальная;
  • Цитомегаловирус;
  • Уреаплазма;
  • Хламидия;
  • Трихомонада;
  • Гонококк;
  • Кандида.

Тринадцатым в этом списке выступает КВМ – контроль взятия мазка, который осуществляется путем поиска гена HMBS. Им обладают эпителиальные клетки, выстилающие уретру. Когда мазок берут из другого места, ищут другой ген. Если в образце будет обнаружено 250 и более копий нужного гена, значит, анализ ПЦР 12 взят корректно, и его итогам можно доверять. Если же копий специфического гена будет меньше нормы, лучше пройти повторную диагностику во избежание ложноотрицательного результата. Что касается положительных ответов, то они принимаются за истину в любом случае.

ПЦР качественная и ПЦР количественная

У этих двух видов ПЦР-диагностики принципиально разные цели: качественный анализ дает ответ на вопрос, имеется ли вообще у пациента искомый микроб, то есть просто «да» или «нет». Только что рассмотренный комплекс ПЦР 12 относится как раз к этой категории.

Но существует еще количественный анализ, или ПЦР в режиме реального времени. Метод основывается на том, что число новых ампликонов (копий заданного участка ДНК возбудителя болезни) прямо пропорционально их исходному количеству. То есть если в пробе с самого начала было много вредоносных молекул ДНК, то с каждым циклом полимеразной цепной реакции их будет становиться вдвое больше, а к концу процесса накопятся миллионы. Современные приборы амплификаторы следят за тем, как меняется количество копий, и по итогам исследования вычисляют примерную концентрацию возбудителя в организме пациента.

Для чего это нужно? В случае с бактериями, простейшими или грибками подобные сведения имеют спорную диагностическую ценность, поскольку численность колоний постоянно меняется под воздействием самых разных факторов, да и уничтожить такие микроорганизмы сравнительно просто. Другое дело – вирус. Это неклеточная форма жизни, которую невозможно истребить подобно тому, как антибиотики справляются с бактериями. В борьбе с вирусами человек может твердо рассчитывать только на свой иммунитет, а возможности противовирусных средств сильно ограничены. Именно когда дело касается вирусов, становится особенно актуальной методика ПЦР в режиме реального времени.

ПЦР количественная критически необходима носителям следующих инфекций:

  • Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ);
  • Гепатит B и C.

Но и в случае с другими вирусами определение нагрузки может оказаться полезным – например, когда речь идет о цитомегаловирусе, герпесе или папилломовирусе. Анализ поможет понять, грозит ли человеку очередное обострение болезни, и насколько высока вероятность передачи инфекции.

Плюсы ПЦР

В чём же заключаются преимущества данного метода?

  • Стопроцентная точность диагностики: при наличии в крови хотя бы нескольких ДНК-фрагментов возбудителя они будут определены реакцией ПЦР, а значит, будет поставлен правильный диагноз. Именно в этом заключается основное отличие подобного метода от иных способов диагностики – общего анализа крови, ИФА и других.
  • Специфичность. Во время осуществления анализа крови ПЦР на боррелиоз, например, нет такого понятия, как ложноотрицательный или ложноположительный результат, что отличает его от иммуноферментного анализа, или ИФА.
  • Анализ можно проводить с целью определения сразу нескольких возбудителей на основе одного образца биоматериала, благодаря чему данный метод становится удобным для пациента, ведь ему не придётся сдавать анализ несколько раз.
  • Быстрота. Нет необходимости в выделении и выращивании возбудителя на особых питательных средах, что необходимо во время бактериологического обследования. Получить готовый результат можно уже непосредственно в день сдачи анализа.

  • Посредством анализа крови ПЦР на гепатит, к примеру, производится определение скрытого возбудителя заболевания в организме, когда пациент выступает в качестве носителя инфекции (ВИЧ или гепатита).
  • Доступная цена. Стоимость анализа ПЦР для определения одного возбудителя колеблется в пределах от двухсот пятидесяти до пятисот рублей. Полуколичественное обследование на вирусы стоит немного дороже – около тысячи рублей.

Для чего используется ПЦР

Что такое ПЦР? Полимеразная цепная реакция представляет собой специфическое исследование, которое используется медиками всего мира. Микробиология располагает обширной информацией о строении вирусов и бактерий, которые являются возбудителями серьезных заболеваний. В качестве исследования используется ПЦР РНК вирусов, антитела ВПГ и пр. Анализ крови ПЦР помогает выявить до 12 различных заболеваний.

Каждое исследование может проводиться отдельно по клиническим показаниям. Существует и комплексное обследование, известное как «ПЦР-12». В этом случае профилактический анализ проводится на каждую болезнь, которую может выявить ПЦР.

  • РНК HCV и другие типы гепатита
  • Определение заболеваний, передающихся половым путем (хламидиоз, уреплазмоз, папиллома и пр.)
  • Мононуклеоз инфекционной природы (вирус Эпштейна-Барра)
  • ВИЧ
  • Герпес
  • Онковирусы (опухолеродные вирусы, вызывающие рак)
  • ЦМВИ (исследование на цитомегаловирус)
  • Листериоз
  • Энцефалит
  • Туберкулез
  • Кандидоз (молочница)
  • Хеликобактерная инфекция (приводит к болезням желудка)

Иногда медицинские учреждения проводят так называемый скрининг, выборочное исследование, которое направлено на географическую область или район города. Многий из этих скринингов позволяет предотвратить вспышки эпидемий вирусов. ПЦР и анализатор заболеваний используется для выявления заразных типов болезней, например, вирусного гепатита.

Сдать анализы можно по собственной инициативе, обратившись к участковому терапевту за направлением. Выявление вирусного ДНК для ПЦР не является проблемой. Отрицательный результат исследования может успокоить даже мнительного пациента.

Что сдают на ПЦР-анализ?

При выборе типа биоматериала для диагностики врачи ориентируются на специфику инфекции, на ее излюбленную локализацию. Ведь от того, попадет ли вредоносная ДНК в пробу, зависит то, будет ли получен достоверный результат анализа.

Для ПЦР берутся следующие материалы:

  • Мазок или эпителиальный соскоб со слизистых оболочек. Это может быть уретра, влагалище, шейка матки, цервикальный канал, анальное отверстие, ротовая, носовая и даже глазная полость. Мазки наиболее актуальны при диагностике заболеваний, передающихся половым путем. Для взятия мазка или соскоба используются зонды с разными наконечниками;
  • Кровь из вены берут, когда нужно обнаружить ВИЧ, гепатит, цитомегаловирус, мононуклеоз или какое-либо заболевание бактериальной этиологии, например, сифилис, холеру или боррелиоз;
  • Биологические жидкости (моча, слюна, сперма, мокрота, секрет предстательной железы, желудочный сок, плевральная, суставная, спинномозговая или амниотическая жидкость, а также бронхоальвеолярный лаваж) берутся по показаниям. Например, ПЦР-анализ мокроты используется при диагностике туберкулеза;
  • Пунктаты и биоптаты органов и тканей, как правило, берутся при подозрении на онкологию. Исключение составляет биопсия желудка, которую проводят для определения наличия Helicobacter pylori – бактерии, вызывающей гастрит и язвенную болезнь.

Хранение и транспортировка биоматериалов

Пробы подлежат отправке в амплификатор не позднее, чем через 2 часа после забора, если они находятся в помещении при комнатной температуре. Когда ПЦР-анализ нужно по какой-то причине отложить, пробирки с биоматериалами допустимо оставить в холодильнике на одни сутки при температуре 2 – 8°С. Максимальный срок хранения – 14 дней, но тогда пробы подвергаются глубокой заморозке (-20°С). После оттаивания они должны быть сразу использованы, повторное замораживание запрещено.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *