Определение группы крови цоликлонами

Стандартное определение группы крови (простой метод)

Для проведения анализа на группу крови нужны эритроциты пациента (берутся из капли крови) и стандартные сыворотки, содержащие известные антигены.

Сыворотки изготавливаются из донорской крови на «Станциях переливания», имеют сроки годности, требуют соблюдения условий хранения. На ампулах указывается номер серии. Для точного анализа берется два набора сывороток разных серий. Это делается с целью исключения ошибок.

На плоской тарелке двумя рядами помещают по крупной капле четырех сывороток (достаточно только III и II, но для контроля берется еще 1 и 1V)

Разными стеклянными палочками (удобно пользоваться глазными пипетками) в капли сывороток вносят исследуемую кровь (соотношение должно получиться примерно 1:10) и осторожно помешивают

Пять минут тарелку покачивают, давая возможность сывороткам хорошо перемешаться с кровью.

Определение группы крови.

Для определения группы крови пользуются стандарт­ными сыворотками групп 0 (I), А (II), В (III), которые спе­циально готовят в лабораториях станций переливания крови.
На белой тарелке на расстоянии 3—4 см слева на­право ставят цифры I, II, III, обозначающие стандартные сыворотки. Каплю стандартной сыворотки 0(I) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный циф­рой I; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II) группы под цифрой II; так же берут сыворотку В (III) группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.

Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворот­ки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномер­ного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой. Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови. В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглюти­нации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.

В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сы­вороткой не произойдет.
Если обследуемый имеет А (II) группу крови, то агглютинации не будет только с сыво­роткой группы А (II), а если обследуемый имеет В (III) группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III). Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB (IV) группы.

Резус-фактор.

Иногда даже при переливании одногруппной крови наблюдаются тяжелые реакции. Проведенные исследования позволили установить, что приблизительно у 15% людей в крови отсутствует особый белок, так назы­ваемый резус-фактор.

Если этим лицам провести повтор­ное переливание крови, содержащей этот фактор, то воз­никнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфлик­том, и разовьется шок. Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фак­тора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.Ускоренный способ определения ре­зус-принадлежности. На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же груп­пы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42— 45°С. Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh—).
Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.

Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть зане­сены в паспорт больного.

Советы для домашнего определения

Подобные советы дают люди, которые «живут» в интернете и собирают любую информацию без разбора. Порой переиначивают ее на свой лад.

Действительно, имеется теория питания в зависимости от типа крови и проведены попытки связать с ней характер личности. Но это разрабатывалось для подбора наиболее подходящего рациона, предотвращения болезней. О связи типа личности с номером крови даже психологи перестали говорить.

Тем более, нельзя судить по любимым блюдам или наклонности к лидерству о своей группе.

В домашних условиях что-либо узнать лучше из полноценных статей, консультаций специалистов. Возможно, имеются медицинские документы (амбулаторная карта, выписки из стационара), в которых есть сведения о вашей крови.

По желанию доноров и пациентов стационаров в паспорт можно проставить печать с указанием этих сведений.

Подобные нашивки применяются на армейской форме

Проведение исследования

Исследование проводят 2 раза. Сначала простым способом, сразу после забора, затем методом перекрестной реакции в дезинфицированной лаборатории. Есть несколько условий проведения реакции. Узнать группу крови с помощью стандартных сывороток возможно при условии, что срок их годности не истек, а титр (концентрация) реагента будет 1:32 и выше

Важно соблюдение температуры в помещении +15…+25ºС

Ход анализа таков:

  1. На тарелке и пластиковом планшете подписывают номера групп возле углублений.
  2. Пробы каждой сыворотки помещают в отведенные углубления в планшете (по 1 или 2 капли).
  3. Пипеткой отмеряют по капле крови самого пациента, располагают их рядом с сыворотками и несколько раз размешивают.
  4. В каждую пробу капают изотонический раствор натрия хлорида.
  5. Дополнительно используют сыворотку АВ.

По истечении 5 минут видны результаты. Для точности выполняют анализ с реагентами 2 разных серий выпуска. Бывает, что реакция агглютинизации плохая, тогда ее наблюдают через микроскоп.

Обязательно во время проверки исследуют и то, какой резус-фактор — положительный или отрицательный. Резус — это белок, который у большого процента населения присутствует на поверхности эритроцитов. Если он есть, резус положительный. Если белок отсутствует, это фиксируется. Резус-фактор определяется с помощью плазмы и особой анти-Д-сыворотки.

Проверяется наличие резуса таким же образом, как и при определении разряда системы АВО — наблюдая за реакцией склеивания.

Определение сыворотками

На белой пластинке отмечают по порядку названия групп крови 0, A, B. Большие капли стандартной сыворотки групп 0(I), A(II), B(III) наносят на пластину напротив ее надписи, а рядом сыворотки другой серии: получается два ряда капель.

Использование разных серий реагентов применяют для исключения ошибки. Каждую каплю стандартной сыворотки аккуратно смешивают с небольшой каплей крови пациента. Все манипуляции выполняют пипеткой или палочкой из стекла. Затем пластину немного покачивают и оценивают результат исследования в каждой капле. Если в течении пяти минут образуются хлопья из агглютинированных эритроцитов, результат принимают за положительный.

Для исключения возможной ошибки, каждую каплю крови на пластине смешивают с каплей физраствора и ожидают еще пять минут. Если хлопья начинают оседать во всех каплях, то проводят контроль реакции, путем смешивания исследуемой крови и стандартного раствора сыворотки группы AB(IV). В последнем случае склеивания эритроцитов не должно регистрироваться.

Пластина с сывороткой крови

Определение группы крови на основании полученных результатов:

  • Первая группа – ни в одной из капель не произошло склеивание эритроцитов
  • Вторая (2) группа крови – положительная реакция крови с сыворотками групп 0(I) и B(III)
  • Третья группа – агглютинация крови со стандартными сыворотками 0(I) и A(II)
  • Четвертая (4) группа крови – положительный результат в трех каплях и отрицательный с контрольной сывороткой AB(IV).

Существует перекрестный способ определения типа плазмы, при этом дополнительно используют стандартные эритроциты. Этот способ определения группы крови помогает выявить плазменные групповые антител α и β и открывает более полную характеристику крови. Применяют перекрестный способ перед переливанием крови. Отбор проб венозной крови проводят заранее, ее отстаивают и отделяют плазму от форменных элементов.

Иногда вместо стандартных сывороток, применяют растворы Цоликлон с моноклональными антителами. Получают их при участии технологий генной инженерии.

При определении группы крови цоликлонами, очень важен квалификационный уровень медицинского работника, его аккуратность и внимательность. Ошибочный результат могут спровоцировать неправильный порядок нанесения реактивов, использование загрязненных или мокрых пипеток, непригодных реагентов, пренебрежение контрольным исследованием.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Метод позволяет определить группу и резус фактор в лаборатории и полевых условиях. В состав набора входит карточка с лунками. На дно лунок уже нанесены высушенные реагенты. Здесь, кроме «анти-А», «анти-В» и «анти-АВ» используется «анти-D», который дает результат резус-фактора.

Можно использовать кровь в любом виде, подойдет соединение с консервантом и взятая из пальца.

Перед исследованием на карточке записывается фамилия пациента, в каждую лунку вносится капля воды для растворения ингредиентов. Затем отдельными палочками в лунки с реактивами добавляют кровь и слегка перемешивают. Окончательный результат «читают» спустя три минуты.

Группа крови всегда перепроверяется при необходимости переливания. Одновременно контролируют групповую и индивидуальную совместимость. Ведь, на самом деле, в крови человека обнаружено гораздо больше антигенных свойств, чем в системе АВ0. Просто они у большинства населения слабо проявляются.

Но у пациента с тяжелыми заболеваниями, изменяющими свойства крови и аллергизирующими организм, они становятся определяющими, требуют считаться с наличием и уровнем в крови. Поэтому знание пациентом собственной группы добавляет уверенности в результате исследования.

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Разведение производится так:

  • В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
  • Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

  • На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
  • Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

  • Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы,
  • Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй,
  • При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III,
  • Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сывороткамиНаличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитамиГруппы крови
0(I)A(II)B(III)AB(IV)0(I)A(II)B(III)
++0(I)
+++A(II)
+++B(III)
+++AB(IV)

+ агглютинация,

– агглютинация отсутствует,

реакцию не проводят.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Цоликлоны

Вид цоликлоновГруппа крови
Результат агглютинацииАнти-ААнти-В
0(I)
+A(II)
+B(III)
++AB(IV)

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

  • Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0,
  • Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования,
  • Стеклянные палочки для перемешивания образцов,
  • Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Метод перекрестной реакции и метод цоликлонов

Методом простой реакции группу устанавливают с помощью лабораторной сыворотки. Второй способ — метод перекрестных реакций — делается лаборантом. Для его проведения используют стандартные эритроциты и плазму самого пациента. Ее добывают, когда в процессе центрифугирования тяжелые клетки отделяются от плазмы.

Для проверки понадобится 2 капли сыворотки после центрифугирования и отстоя не менее чем 1, 5 часа. В лабораторную планшетку опускают 2 капли добытого биологического материала и добавляют каплю со стандартными красными кровяными тельцами. В первую каплю плазмы помещают кровяные тельца с агглютиногенами 2 группы, а во вторую пробу — с антигенами третьей.

Метод перекрестной реакции считается контрольным и более достоверным. Реакция с эритроцитами оценивается следующим образом:

  • Агглютинация есть и в 1, и во 2 капле. Это кровь обозначается как 0 или 1.
  • Реакции нет в обеих случаях — это 4.
  • Реакция склеивания там, где добавляли эритроциты второй категории — это 2. И, соответственно, 3 группа, где контрольные эритроциты третьего варианта.

Метод цоликлонов

Группу системы АВО также можно установить и с помощью цоликлонов. Эти реагенты сделаны при помощи достижений генной инженерии из крови лабораторных мышей. Тут используют моноклональные антитела, продуцируемые только из одной антителообразующей клетки.

Экспресс-методика

Данное тестирование крови дает возможность определить группу крови и ее резус фактор практически в любых домашних условиях. В экспресс-наборе имеется специальная карточка, в которой проделаны вмятины. Главное преимущество экспресс-теста — это скорость анализа и удобство при проведении. Результат исследования известен приблизительно по истечению пяти минут.

Экспресс-тест

Помимо стандартных антител, также применяется «анти-D». Он дает данные о резус- факторе пациента. Для данного анализа кровь подходит практически в любом виде. Специфические реагенты уже входят в состав экспресс-методики.

Перед переливанием или серьезным хирургическим вмешательством группа крови перепроверяется с целью абсолютной точности данных. Очень важна также индивидуальная совместимость человека, помимо групповой.

Элементы кровяной системы

В жидкой подвижной плазме крови равномерно распределены клеточные элементы: эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. Форменные элементы занимают до 35-45% от общего объема крови. Помимо этого в плазме находятся жировые частицы клеток, так называемая «кровяная пыль» (гемоконии). Эритроциты в крови могут содержать в своем составе специфические антигены (агглютиногены A и B). В плазме крови могут обнаруживаться антитела (агглютинины α и β). Комбинации антигенов и антител позволяют классифицировать группы крови по системе AB0.

Варианты комбинации реакции агглютинации

Иные виды групповых систем крови избирают только присутствие антигенов в эритроцитах. Антитела к ним обычно появляются при вливании реципиенту неподходящей крови, иммунологической несовместимости группы крови беременной женщины и плода.

Согласно системе AB0 всех людей разделяют на такие группы:

  • Первая 0 (I) (1 группа крови) – в красных кровяных тельцах нет антигенов, а в сыворотке обнаруживаются агглютинины α и β
  • Вторая A (II) – содержит в своем составе агглютиноген A
  • Третья B (III) (3 группа крови) – присутствует агглютиноген B
  • Четвертая AB (IV) – вместе фиксируются эритроцитарные агглютиногены A и B.

Система AB0 дает возможность избежать опасных последствий при неправильном переливании крови. Для идеальной совместимости крови нужно, чтобы кровь донора соответствовала такой же группе в системе AB0, что и кровь пациента. Переливание чужеродной группы крови может вызвать иммунологическую несовместимость и приведет к трансфузионным осложнениям. Перед процедурой переливания крови обязательно изучают состав крови и проводят ряд анализов на совместимость.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Флаконы с различными цоликлонами

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном). Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I. Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Определение групп крови стандартными сыворотками

В основе определения групп крови лежит реакция агглютинации, то есть слипания. Комки образуются, если в пробе имеются одновременно агглютиноген А и агглютинин альфа или агглютиноген В и агглютинин бета или же и то, и то одновременно. Агглютиногены содержатся в эритроцитах, а агглютинины являются компонентами плазмы крови.

В соответствие с этими признаками выделяют четыре группы крови по системе АВ0:
— I (0) – не содержит агглютиногенов, только агглютинины;
— II (A) – агглютинин b, агглютиноген А;
— III (B) – агглютинин a, агглютиноген B;
— IV (AB) – содержит только агглютиногены.

Одним из методов установления группы крови является определение групп крови по стандартным сывороткам. Стандартные сыворотки содержат в себе заведомо известные агглютинины: групп I, II и III

Обратите внимание, на фотографию ниже, возможна она будет вам полезна для лучшего восприятия текста

Протокол процедуры. Алгоритм.
Есть три сектора. Они могут быть в пределах одной тарелки, а могут быть специальными лунками. Секторы подписываются I, II и III, в каждый наносят соответствующую сыворотку.
У пациента выдавливают каплю крови, предварительно протерев палец спиртом. И переносят по капле стеклянной палочки в сектора с сыворотками. Затем перемешивают кровь с сывороткой до розового цвета и засекают время. Реакция проходит в течение пяти минут. Необходимо помнить, что при работе с каждой следующей сывороткой палочка меняется, чтобы не допустить искажения результатов из-за смешения сывороток. По прошествии указанного времени в лунки добавляют изотонический раствор NaCl и перемешивают.

Положительный результат реакции выглядит как красные зёрна, образованные слипшимися эритроцитами, при отрицательном — смесь сохраняет равномерную розовую окраску. Реакция протекает в течение 3-4 минут.

Анализ результатов
Дальнейшее определение групп крови – это элементарная комбинаторика. Если результат в трёх лунках отрицательный, то это группа 0, если прошла реакция только с II и I сыворотками, то группа A, только с I и III – B, а если с обеими – то AB. Все прочие комбинации – являются артефактом и указывают на неверное проведение процедуры анализа.
У ошибок могут быть разные причины. Самые частые это – использование слабых сывороток, у которых закончился срок годности; проведение анализа со слишком большой каплей крови пациента – она должна быть на порядок меньше, чем количество сыворотки, неспецифическая холодовая агглютинация при температуре среды, не соответствующей нормальной и слишком долгое время проведения реакции. Во время подсыхания на периферии смеси образуется зернистость, которая не должна учитываться при оценке группы крови.

Для наглядности, посмотрите это видео.

https://youtube.com/watch?v=TyzlgktD-ys

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *