Мазок ПЦР у женщин

Что такое ПЦР метод

Полимеразная цепная реакция или ПЦР — это метод исследования, который позволяет обнаружить нуклеиновые кислоты (ДНК) микроорганизмов, добиться повышения их концентрации в биологическом образце. Метод используется в медицине не только в качестве анализа на ЗППП, но и для установления отцовства, для диагностики наследственных патологий. Метод применяют и в экспериментальных целях для клонирования и выделения новых генов.

Благодаря такому методу удается получить достаточный участок ДНК, чтобы подтвердить наличие того или иного микроорганизма. Таким образом, ПЦР помогает обнаружить даже скрытую инфекцию, если в образце присутствуют молекулы ее ДНК.

Особенно актуален метод полимеразной цепной реакции в венерологии, гинекологии и урологии для диагностики ИППП. Дело в том, что большинство инфекций развиваются медленно и никак себя не проявляют. Кроме того, их сложно обнаружить при помощи других исследований из-за недостаточной чувствительности. Особенно опасны вирусы, такие как ВПЧ (вирус папилломы человека), ВИЧ, гепатит, вирус герпеса которые могут приводить к инвалидности, смерти пациента, развитию онкологии.

Диагностика ИППП методом полимеразной цепной реакции помогает обнаружить единичные клетки микроорганизмов, что невозможно сделать при помощи микроскопического или бактериологического исследования. Также метод очень эффективен в диагностике внутриклеточных паразитов, например, хламидий.

Полимеразная цепная реакция показана пациентам, у которых можно заподозрить наличие инфекции, передающейся половым путем. Основные симптомы, которые могут выступать показанием к сдаче анализов:

  • жжение, зуд в паху;
  • покраснение наружных половых органов;
  • появление выделений из влагалища или уретры с неприятным запахом.

Как правило, полимеразная цепная реакция показана, если пациент уже сдал ОАК и ОАМ, мазок из влагалища и уретры с микроскопическим и бактериологическим исследованием или ИФА (иммуноферментный анализ), а возбудителя выявить не удалось.

ПЦР используется не только для выявления ИППП, метод эффективен в отношении следующих инфекций:

  • гарднереллез;
  • сальмонеллез;
  • цитомегаловирус;
  • гепатиты;
  • токсоплазмоз;
  • краснуха;
  • мононуклеоз и др.

Полимеразная цепная реакция показан людям, которые ведут беспорядочную половую жизнь и могли заразиться ИППП.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

ПЦР (полимеразная цепная реакция, ПЦР-анализ) — это метод лабораторной диагностики различных вирусов, бактерий, простейших на основании выявления их генетического материала (РНК и ДНК) в исследуемом биологическом материале: в крови, слюне, эякуляте (сперме), моче, выделениях из половых путей, мазках, соскобах и т.д.

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение типоспецифического (т.е. характерного для конкретного микроорганизма) участка РНК или ДНК, вследствие чего нарабатывается достаточное для точной идентификации данного микроорганизма количество РНК или ДНК.

Метод ПЦР является молекулярно-генетическим методом исследования.

В настоящее время полимеразная цепная реакция (ПЦР) является самым точным и чувствительным методом диагностики скрытых инфекций (инфекций, передаваемых половым путем) и иных инфекционных заболеваний после культурального исследования (посева на среду).

Таким образом, результаты исследования методом ПЦР свидетельствуют о наличии/отсутствии непосредственно инфекционного агента (вирусов, бактерий, простейших) в исследуемом органе (образце клеток, ткани).

Основным преимуществом метода ПЦР является высокая чувствительность и специфичность, т.е. способность определить возбудителя заболевания при наличии в пробе всего нескольких молекул его ДНК или РНК. Поэтому возможным становится обнаружение возбудителей заболеваний (в том числе скрытых инфекций) даже в тех случаях, когда другими методами их выявление не возможно.

Специфичность ПЦР (т.е. способность безошибочно определить данный вирус, бактерию) близка к 100%, что значительно превышает возможности микроскопии, иммуноферментного анализа (ИФА).

По этой причине исследование методом ПЦР нашло широкое применение в практике врачей Курортной клиники женского здоровья при экспертном выявлении скрытых инфекций: хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомоноза, бактериального вагиноза, вирусов папилломы человека и других вялотекущих либо скрыто существующих инфекций.

Следует учитывать, что результат ПЦР-исследования распространяется лишь на орган (ткань), клеточный материал которого с помощью мазка-соскоба забирается на исследование.

Это вносит известные ограничения, не позволяющие в ряде случаев судить о распространенности процесса. Например, выявление хламидий в канале шейки матки не позволяет утверждать присутствие хламидий в маточных трубах, ткани яичников, суставах, легких и иных органах и тканях.

Таким образом, метод ПЦР (ПЦР-анализ) отличается высокой информативностью и достоверностью относительно инфицирования (заражения) конкретного органа (участка ткани), а метод ИФА косвенно показывает распространенность процесса и возможную вовлеченность в инфекционный процесс органов и тканей, недоступных для прямой диагностики.

Методы ИФА и ПЦР взаимо дополняют друг друга. В рутинной (повседневной) практике Курортной клиники женского здоровья мы применяем все методы исследования для быстрой, достоверной диагностики.

Забор крови и мазков с целью проведения исследований методами ИФА и ПЦР в Курортной клинике женского здоровья осуществляют профессионально подготовленные акушерки, прошедшие специализацию по лабораторной диагностике. Забор крови и мазков выполняется безболезненно и в комфортных условиях.

Особенности диагностики инфекций, передаваемых половым путем (скрытых инфекций), и условия подготовки к исследованиям подробно изложены на нашем сайте в соответствующих статьях.

  • Прием уролога с целью «Провериться на ВСЁ»
  • Прием гинеколога с целью «Провериться на ВСЁ»
  • Как подготовиться к приему гинеколога?

Мы в полном Вашем распоряжении при возникновении любых сомнений или пожеланий.

Мы работаем без выходных и праздничных дней:

понедельник – пятница с 8.00 до 20.00,
суббота, воскресенье, праздничные дни с 8.00 до 17.00.
Прием по предварительной записи по многоканальному телефону 8 (800) 500-52-74 (звонок по России бесплатный), или +7 (928) 022-05-32, или info@kurortklinika.ru.

Где применяется диагностика методом ПЦР

Возможности диагностики инфекционных заболеваний с применением полимеразной цепной реакции велики, с ее помощью можно определить самые разнообразные вирусы, вызывающие такие инфекции как:

  • ВИЧ – ПЦР-диагностика ВИЧ очень эффективна для обнаружения вируса, который вызывают эту болезнь, блокирует защитные функции и открывает путь в организм человека всевозможным патологиям;
  • герпес – диагностика герпеса методом ПЦР может обнаружить вирус у человека только во время рецидива, этот способ позволяет установить какого он типа;
  • мочеполовые инфекции – ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций (хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, микоплазмоз, трихомониаз, кандидоз и прочие) на сегодняшний день активно применяется, так как определить возбудителей ИППП с помощью традиционных анализов сложно, а диагностика инфекций методом ПЦР позволяет в минимальной пробе выявить наличие патогенных микроорганизмов и вовремя начать терапию;
  • гепатит – диагностика гепатита методом ПЦР является одним из важнейших шагов для определения причин его появления и назначения адекватной схемы лечения, без использования современных молекулярно-биологических методов поставить адекватный диагноз данной патологии невозможно;

Возможности диагностики инфекционных заболеваний с применением полимеразной цепной реакции велики, с ее помощью можно определить самые разнообразные вирусы, вызывающие различные инфекции

листериоз – ПЦР-диагностика позволяет выявить даже единичных возбудителей данного заболевания в кратчайшие сроки;
цитомегаловирус – ПЦР-диагностика этого заболевания считается прогрессивной, но не дает возможность определить является ли инфекция первичной или повторной, другими словами не различает активный вирус от спящего;

туберкулез – ПЦР-диагностика туберкулеза помогает выявить наличие активной формы патологии в несколько раз оперативнее, чем другие исследования, также с помощью этого анализа можно осуществлять эпидемиологический контроль за бактериовыделителями на фоне кажущейся стабилизации состояния больного

Для диагностики туберкулеза у детей делают пробу Манту, если она положительная, то метод ПЦР позволяет с высокой точностью подтвердить установленный диагноз и определить не только туберкулез легких, но и поражение этим вирусом кожи, почек, кишечника и других органов;
вирус папилломы человека – ПЦР-диагностика ВПЧ используется для определения его типа и помогает определить количественные и качественные характеристики вируса;
клещевой энцефалит
– результаты ПЦР при определении хронической формы заболевания являются самыми надежными;
глистная инвазия – диагностика паразитов помогает выявить инвазии простейшими, а также внутриклеточными паразитами, но он не позволяет определить степень тяжести заражения и количество вредителей в организме;
хеликобактерная инфекция – с помощью метода ПЦР возможно определение высокопатогенных и низкопатогенных штампов Хеликобактер Пилори, это важно для прогноза заболевания и эффективной терапии.. Это не полный список заболеваний, которые выявляются с помощью анализа ПЦР

Большинство этих патологий на ранней стадии практически незаметны, но последствия от их воздействия на организм крайне негативные и часто опасные для здоровья и жизни человека

Это не полный список заболеваний, которые выявляются с помощью анализа ПЦР. Большинство этих патологий на ранней стадии практически незаметны, но последствия от их воздействия на организм крайне негативные и часто опасные для здоровья и жизни человека.

Беременным женщинам назначают анализ ПЦРК, чтобы выявить инфекции, передающиеся половым путем, значительно увеличивающие риск появления рака шейки матки, пагубно влияющие на протекание беременности и здоровье ребенка. Поэтому крайне важна диагностика ЗППП, чтобы не допустить заражение плода патогенными микроорганизмами.

Исходя из всего вышеперечисленного можно сделать вывод, что лабораторная диагностика с применением метода ПЦР помогает врачу установить точный диагноз и назначить эффективную терапию в каждом индивидуальном случае.

Разновидности ПЦР-анализов

Вариаций такой ПЦР диагностики существует много. Выбор определенного метода зависит от многих факторов: предположительного диагноза, возможностей доступных лабораторий, метода взятия материала и пр.

Наиболее часто используются такие разновидности ПЦР:

  • вложенная;
  • ступенчатая;
  • с горячим стартом;
  • виртуальная;
  • ассиметричная;
  • в реальном времени и т. д.

Преимущественно используют ПЦР в реальном времени, так как способ характеризуется самыми точными результатами и максимальной скоростью обработки данных. После его применения заключение готово через час-два.

Если врач выдает направление на обследование с применением полимеразной цепной реакции, то он должен уточнить, какой именно биоматериал необходимо предоставить пациенту и каким образом подготовиться к отбору пробы.

Анализ крови

Кровь в качестве биоматериала для тестирования берут при подозрении на ВИЧ, вирусный гепатит, токсоплазмы, половой герпес и цитомегалию. Для большинства этих патогенов до использования этого метода диагностика базировалась на выявлении антител к возбудителю, что сильно затягивало время обнаружения микробов в тот период, когда антитела еще не вырабатываются.

Перед сдачей крови для диагностики в данном случае не нужны особые приготовления, но лучше, если проба будет отобрана натощак. Единственное обстоятельство, способное серьезно исказить результаты — прием антибиотиков, поэтому сдаче должен предшествовать временной отрезок после приема подобных лекарств в несколько дней или недель в зависимости от типа антибиотика.

В самых современных клиниках в последнее время для отбора крови на ПЦР используют вакуумные системы, которые минимально повреждают кожные покровы и сводят к минимуму вероятность попадания в пробу загрязняющих агентов из воздуха, инструментов или рук лаборантов.

Анализ мазка

Используется как в гинекологии, так и в венерологии для определения заболеваний, передающихся половым путем. Часто назначают ПЦР мазка во время беременности для выявления скрытых факторов, способных негативно повлиять на формирование плода или ход беременности.

Подготовка к отбору материала заключается в том, чтобы полностью исключить половые контакты за несколько суток до процедуры. Проводить спринцевания марганцовкой или настоями трав тоже нельзя. На протяжении критических дней и 2-х дней после них мазок на ПЦР-анализ не берется.

Отбор биоматериала производят в лаборатории из влагалища, шейки матки, цервикального канала или уретры.

ПЦР-анализ мазка позволяет выявить патоген, который устойчив к определенному виду антибиотиков. Кроме того, показаниями к такому виду диагностического обследования выступают:

  • осложненная беременность без видимых причин;
  • острое течение венерической болезни;
  • предположительное хроническое течение венерического заболевания;
  • выявление причин бесплодия или самопроизвольных абортов.

Анализ кала

Анализ кала с применением полимеразной цепной реакции назначается специалистом для уточнения наличия инфекции. Подготовка к отбору пробы кала для ПЦР заключается в следующем:

  • исключить за несколько суток слабительные средства в виде любых свечей, масел или оральных медикаментов;
  • не употреблять накануне лекарства или продукты, которые придают калу выраженную окраску.

Материал для ПЦР-определения лучше всего доставить в специальном контейнере для кала с палочкой. Внутреннее пространство контейнера стерильно, поэтому протирать или промывать его не следует

Во время отбора образца важно отслеживать, чтобы не задеть внутреннюю поверхность приемника, также в пробе не должно быть следов мочи. Перед отбором запрещено применение клизм

Анализ мочи

Такое исследование с помощью ПЦР позволяет извлечь ДНК образец вируса или бактерии. Забор мочи лучше проводить утром натощак. Лучше всего, если это будет происходить непосредственно в лаборатории.

Обязательные условия подготовки для получения результатов исследования мочи в лаборатории полимеразной цепной реакции:

  • выдержать 3 недели после приема антибиотиков;
  • перед отбором жидкости не пить и не есть;
  • запрет вагинального секса за сутки до сдачи пробы;
  • в контейнер нужно поместить первую порцию материала после пробуждения.

Как выполняется ПЦР

То, как берут мазок, мало отличается от обычного забора отделяемого из влагалища. Процедура выполняется на гинекологическом кресле. Диагностика проводится в ближайшее время, но исследуемый материал может сохраняться долгое время.

Сама реакция состоит из нескольких этапов. Ее проводят в специальном приборе – амплификаторе. В нем происходят циклы нагревания и охлаждения с высокой точностью температуры. Чтобы биологический материал не испарялся, к смеси добавляют вазелиновое масло.

Для проведения полимеразной цепной реакции используют следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, которая содержит участок нуклеиновой кислоты, требующий воспроизведения;
  • два праймера – коротких участка нутклеотда, которые нужны для воспроизводства матричной цепочки;
  • термостабильный фермент ДНК-полимераза;
  • нуклеозидфосфаты;
  • магний в состоянии ионов;
  • буферный раствор, который обеспечивает необходимую кислотность среды, содержит соли, бычий сывороточный альбумин.

Все исследование проходит в три стадии. Сначала выполняется денатурация. Матрицу ДНК нагревают до 98°С, чтобы ее две цепочки разошлись. Для разогрева достаточно от 30 секунд до 2 минут. Во время денатурации происходит разрушение водородных связей в молекуле, она теряет структуру двойной спирали. В некоторых случаях проводится и предварительный разогрев праймеров. Этот тип исследования называют горячим стартом, он помогает снизить количество побочных продуктов реакции.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

После денатурации запускается отжиг. В это время температуру смеси начинают снижать. Обычно она уменьшается на 4-5°С от исходной. Праймеры присоединяются к одноцепочечной ДНК. Их подбирают с определенным составом, который помогает выделить и отграничить исследуемый участок нуклеиновой кислоты. Эта стадия длится 0,5-2 минуты. Если температура подобрана неверно, праймеры могут не образовать связь с нужным участком молекулы или привязаться в неверном месте и образовать неверные продукты.

Последняя стадия – элонгация. Во время прохождения этого этапа подбирается оптимальная температура, которая подходит для используемой дезоксинуклеотидтрифосфаты. На каждую тысячу пар образующихся оснований нужно около 1 минуты. Этот этап длится 7-10 минут.

Этот цикл повторяется несколько раз.

Сколько по времени делается исследование?

Все зависит от поиска конкретного возбудителя, характера образца и количества искомых инфекций. Для получения ответа необходимо провести не менее 30 полных циклов амплификации, при длительности одного до 15 минут. Поэтому для получения результата нужно до 7 часов, а иногда и больше. Ответ выдается пациенту или отправляется лечащему врачу не позднее, чем через сутки после забора материала.

Подготовка к ПЦР-диагностике и условия сдачи анализов

Подготовка к ПЦР довольно проста: для этого необходимо строго выполнять все рекомендации лечащего врача и соблюдать несколько неоспоримых условий для более точного результата. В зависимости от метода забора материала на обследование нужно помнить, что:

  • для диагностики с помощью венозной крови пациенту необходимо сдавать анализ натощак, исключая даже употребление жидкости;
  • для сдачи мазка нужно воздержаться от половых контактов как минимум на пару суток. Допускается провести гигиену половых органов с вечера, но не в день сдачи анализа. Стоит выбрать оптимальное время для проведения исследования с учётом менструального цикла – за два дня до или после него;
  • для любого метода забора материала следует прекратить за пару недель до сдачи применение антибактериальных лекарственных препаратов, предварительно проконсультировавшись с лечащим врачом, поскольку это может повлиять на достоверность результата;
  • для сдачи анализа мочи на определение наличия возбудителей необходимо не только соблюдать стерильность и гигиеничность, но и качественность собранного материала для исследования, несущего более точную информацию. Поэтому допустимо выдержать 2-3 часа с последнего мочеиспускания до сбора мочи или использовать утренний образец, дающий большую вероятность показать наличие воспалительного процесса.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, заключающийся в выявлении специфических (индивидуальных для каждого микроорганизма, вируса) антител.

Антитела (иммуноглобулины, Ig) — специфические белки-защитники, вырабатываемые лейкоцитами (белыми кровяными тельцами) в ответ на появление в организме чужеродного генетического материала (вирусов, бактерий, простейших).

Иными словами, результат иммуноферментного анализа (ИФА) показывает не факт наличия инфекционного агента (инфекции) в организме, а состояние иммунитета к этому инфекционному агенту.

Таким образом, на основании результатов исследования крови методом ИФА можно лишь опосредованно (косвенно) судить о наличии /отсутствии инфекционного агента (вирусов, бактерий, простейших) по ответной реакции на него иммунной (защитной) системы организма.

В зависимости от срока давности существования в организме человека вирусов, бактерий, простейших вырабатываются антитела классов А, M, G (IgА, IgM, IgG).

Антитела классов А, M, G свидетельствуют о свежем, недавнем или давно существующем заражении соответственно.

По комбинации количественных показателей антител данных классов можно судить об обострении или снижении активности хронического инфекционного процесса, или повторном заражении.

Данная информация представляет в гинекологии и дерматовенерологии известную ценность, позволяя ответить на вопрос «кто кого заразил?» и подобрать лечение в зависимости от длительности инфекционного процесса.

Исследование крови методом ИФА в гинекологии широко используют для диагностики микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомоноза, гарднереллеза, гонореи, TORCH-инфекций (токсоплазмы, краснухи, цитомегаловирусной инфекции и герпеса).

В случае низкой иммуногенности инфекционного агента (инфекции) либо недостаточной активности иммунной системы выработка антител (иммуноглобулинов классов А, M, G) может отсутствовать или быть диагностически незначимой при фактическом (реальном) наличии инфекционного агента (инфекции) в организме по данным полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Слабой иммуногенностью (способностью существовать незаметно для иммунной системы) обладают , , .

Результаты иммуноферментного анализа (ИФА) в ряде случаев могут быть ложноположительными, т.е. при фактическом отсутствии инфекционного агента (инфекции) в организме иммуноферментный анализ (ИФА) определяет наличие антител к нему.

Высокая частота ложноположительных реакций часто отмечается при диагностике методом ИФА .

Низкой иммуногенностью инфекционного агента (бактерий, вирусов, простейших) и индивидуальными особенностями иммунитета человека объясняется кажущееся противоречие результатов ИФА и ПЦР, при котором исследование методом ИФА не находит инфекцию, а метод ПЦР свидетельствует о наличии инфекции в организме.

Таким образом, диагностика инфекционных заболеваний, включая инфекции, передаваемые половым путем (анализ на скрытые инфекции), требует комплексной (совокупной) оценки результатов нескольких диагностических методов.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет выявить специфические белки, возникающие в организме человека при наличии онкологического процесса — так называемые онкомаркеры.

  • ИФА инфекции стоимость
  • ИФА онкомаркеры стоимость
  • ПЦР стоимость
  • Стоимость приема гинеколога с целью «Провериться на ВСЁ»
  • Стоимость приема уролога с целью «Провериться на ВСЁ»

Сдача анализа: особенности процедуры и расшифровка результатов

Все пациенты, обследуемые по методу ПЦР, получают наиболее достоверный результат. В данном случае возникновение ошибок практически исключено. Результаты данного анализа готовятся достаточно быстро, что облегчает постановку диагноза и обеспечивает своевременное назначение лечебных мероприятий.

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

  1. Запрещено проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.
  2. Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
  3. Моча сдается утром в стерильный контейнер.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Расшифровка результатов

Результат данного вида обследования может быть положительным и отрицательным. Отрицательный результат анализа крови говорит о том, что инфекционных элементов в сданном материале нет. Большое количество проведенных анализов ПЦР показывает отрицательный анализ.

Положительный анализ ПЦР подтверждает тот факт, что в сданном материале обнаружены инфекционные агенты и необходимо качественное, максимально эффективное лечение больного.

Результат может быть положительным, но какие-либо проявления заболевания отсутствуют. Это говорит или о начале заболевания, или о его носительстве. Если выявлено носительство болезни, то никакие лечебные мероприятия не требуются. Просто необходимо наблюдаться у специалиста. Примерами таких заболеваний являются:

  • папилломавирусная инфекция;
  • герпес и др.

Обычно их обнаруживают в слюне, соскобе из цервикального канала, уретре. Однако необходимо помнить, что больной человек может заразить абсолютно здоровых, несмотря на то, что его данная болезнь никак не беспокоит. Заболевание может перейти в хроническую форму. Следует отметить, что в тех случаях, когда ПЦР анализ крови показал положительный результат, назначение лечебных мероприятий просто необходимо.

Анализ ПЦР имеет еще и количественную характеристику. Количественный результат оценивает только специалист, он индивидуален для разных инфекций. Основываясь на количественной характеристике, врач способен понять, насколько активен данный патологический процесс, поставить точную стадию развития конкретного заболевания. Благодаря анализированию полученных результатов специалист может выбрать необходимый препарат и, возможно, пересмотреть дозировку препарата.

Точность ПЦР диагностики

Специалистам дают ПЦР 3 важнейших характеристики, среди которых выделяют:

Диагностика инфекций методом ПЦР имеет большую вероятность обнаружения инфекционных агентов. ПЦР анализ крови и других жидкостей высокоспецифичен. С его помощью можно легко выявить конкретный инфекционный процесс. Диагностика ПЦР обладает высокой чувствительностью. Если в исследуемом материале содержится минимальное количество инфекционных агентов, метод ПЦР будет всегда положителен.

Наиболее редко бывает ложноположительный результат. Если инфекции нет, то и результат отрицателен.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *