Определение группы крови

Технические причины

  1. Некорректное расположение реагентов на планшете.
  2. Нарушение количественного отношения цоликлонов и эритроцитов.
  3. Недостаточная стерильность планшетов и пипеток.
  4. Неверная запись в историю болезни.
  5. Несоблюдение времени реакции агглютинации. В случае ожидания менее 5 минут реакция может не наступить при наличии слабых агглютиногенов. При передержанной реакции подсыхание капель с краев может симулировать ложноположительный результат.
  6. Температура воздуха свыше 25 °C. Рекомендуется использовать специальные реагенты с поправкой на температурные условия, опускать внешнюю часть планшета в холодную воду.
  7. Недостаточное или избыточное центрифугирование. В первом случае возможны ложноположительные результаты, во втором – ложноотрицательные.

Какая кровь бывает у людей?

Группа крови в течение всей жизни у каждого человека остается неизменной. Люди с одним типом могут отличаться от людей с другим по причине того, что у каждого человека разное количество агглютиногенов A и B в кровяных клетках, а также совсем разное количество агглютининов α и β, которые содержатся уже в амбоцептере крови.

В природе существует несколько видов групп крови:

  • 0(I) – эта содержит только агглютинины α и β, агглютиногенов нет.
  • A(II) – содержится только агглютинин β и агглютиноген A.
  • В(III) – агглютинин α и агглютиноген B.
  • AB(IV) группа крови — содержит агглютиногены A и B, агглютинины отсутствуют.

Откуда появилась классификация? Впервые открыл все существующие типы крови у людей врач из Австрии. Это открытие позволило ученому получить премию А.Нобеля по медицине в 1930 году. Также открытие групп помогло остановить смертельные исходы в процессе переливания крови от одного человека другому. Человек, которому необходимо сделать переливание называется реципиентом. Человек же, что сдает свою кровь, называется донором. Наиболее подходящим типом для реципиента будет кровь идентичная его типу.

Помимо существующих антиглютиногенов A и B в кровяных клетках можно наблюдать и другие антигены, например, резус-факторы. В ситуации, если кровь не совместима по резус-фактору, то проводить переливание категорически запрещено. Впоследствии могут возникнуть плачевные случаи, вплоть до летального исхода.

Проведение исследования

Как узнать группу крови, откуда ее берут для исследования? Эти вопросы интересуют всех заинтересованных людей. Для этого можно обратиться в лечебное учреждение, где нужно сдать биологическую жидкость из пальца. Анализ на группу крови можно проводить тремя основными способами:

  • по изогемагглютиновым сывороткам;
  • по изогемагглютиновым сывороткам и стандар­тным клеткам крови (перекрёстный способ);
  • метод с применением МКА (цоликлоны анти-A и анти-B).

Обычно в лабораториях переливания крови проводят исследование по первому способу, т.е. с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток. Процесс заключается в том, что тест проводится на обнаружение антиглютиногенов A и B в освещенной лаборатории с температурой воздуха в пределах 15-25 °C. Для этого берут исследуемый материал и на специально подготовленную тарелку или пластину наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворот­ки I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

Чтобы избежать возникновения каких-либо неточностей, наносят две серии сывороток каждого из типов. Должно получиться 6 капель. Эти 6 ка­пелек образца анализируемой биожидкости переносят на специальную пластину в другие 6 точек, при этом каждую каплю размещают рядом с капельками сыворотки (крови понадобится в 10 раз меньше, чем используемое количество сыворотки), после этого их аккуратно смешивают уже другими палочками со слегка закругленными краями. Во время смешивания пластину аккуратно покачивают из стороны в сторону. Склеивание клеток происходит в течение 30 секунд. В те капли биологической жидкости, где прошло соединение, добавляется немного изотонного раствора хлорида натрия, и оценивается результат теста.

Вторым тестом на группу является перекрёстный метод. Его чаще применяют в серологических лабораториях. Перекрестный метод заключается в том, что сдавать биологический материал нужно на определение содержания антиглютиногенов A и B с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток и антител α и β при помощи эритроцитов. Для этого на специальную тарелку белого цвета наносят маркером 6 клеток, в которые капают пипеткой по 1 капле сыворотки из анализируемой биожидкости, а рядом располагают по маленькой капле эритроцитов определенных групп 0(I), A(II), B(III) – по два раза.

В третьем тесте на выявление применяют МКА. Используется гибридомная биотехнология. Гибридома представляет собой гибрид клеток, полученных  из миеломы и иммунного лимфоцита, что производит МКА. К моноклональным антителам (МКА) относят: цоликлоны анти-A и цоликлоны анти-B. Их наносят на приготовленную пластину белого цвета по 1 большой капле под специальными надписями анти-A и анти-B. После, рядом с каплями антител размещают по маленькой капле анализируемой биожидкости. Агглютинация происходит в последующие 2–3 минуты.

Погрешности при проведении исследования

Определение группы крови описанными тестами  может осложниться появлением некоторых характерных ошибок. Все возможные ошибки можно классифицировать на три группы: технические, биологические и сывороточные.

К техническим ошибкам относятся поспешная оценка результатов, несоблюдение режима нужной температуры, отсутствие маркировки платин, неверное соотношение количества крови и сыворотки. Биологические ошибки появляются в тех случаях, когда красные кровяные тельца соединились со всеми сыворотками, на исследование берут инфицированную биожидкость, происходит полная панагглютинация, неактивные антигены A и B. Сывороточные ошибки могут быть, если берут инфицированную, просроченную или сыворотку с титром ниже 32.

Во избежание указанных погрешностей нужно соблюдать строгие правила при проведении тестов на установление своей группы. Следует использовать разные тарелки (чистые и сухие), категорически нельзя смешивать компоненты одной и той же палочкой, следить за сроками и температурой, ну и конечно, процедура определения группы крови не должна проходить в домашних условиях, а только в медицинском учреждении специалистами.

Таким образом, только исследования в лабораторных условиях помогут ответить на главный вопрос, как узнать группу крови. И  никакая иная информация или советы других людей не позволят узнать свою группу, особенно в домашних условиях. Поэтому для тех, кто задается вопросом, какая у меня группа крови, для проведения правильного исследования с точными результатами необходимо специальное оборудованное помещение, где будут соблюдаться все требования, а не домашние условия с использованием подручных предметов.

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Разведение производится так:

  1. В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
  2. Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

  1. На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
  2. Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

  • Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы;
  • Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй;
  • При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III;
  • Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками   Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами  Группы крови
0(I)A(II)B(III)AB(IV)0(I)A(II)B(III)
++0(I)
+++A(II)
+++B(III)
+++AB(IV)

+ агглютинация;

– агглютинация отсутствует;

— реакцию не проводят.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Цоликлоны

 Вид цоликлонов Группа крови
Результат агглютинацииАнти-ААнти-В
0(I)
+A(II)
+B(III)
++AB(IV)

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

  • Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0;
  • Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования;
  • Стеклянные палочки для перемешивания образцов;
  • Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *