ПЦР-тест на туберкулез

Преимущества и недостатки пробы Манту

Пробой Манту называется метод исследования, при котором туберкулин вводится детям под кожу с внутренней стороны предплечья. Туберкулин не является вакциной, не содержит живую или инактивированную микобактерию туберкулеза.

Специфический иммунный ответ детского организма в виде папулы на коже вызывают продукты жизнедеятельности микобактерий. Проверка и оценка результата введения туберкулина производится через 72 часа, размер папулы измеряется прозрачной линейкой.

Согласно федеральным клиническим рекомендациям Российского общества фтизиатров выделяют несколько типов реакции:

  • отрицательная реакция – папулы либо нет, либо ее размер менее 1 мм, ребенок никогда не контактировал с микобактериями туберкулеза;
  • сомнительная реакция – до 5 мм в диаметре, не имеет диагностического значения;
  • положительная реакция – уплотнение от 5 до 16 мм – первичный контакт с палочкой Коха состоялся, но болезнь не развилась;
  • гиперергическая реакция – папула более 17 мм, гнойно-некротическое воспаление и увеличение регионарных лимфоузлов свидетельствуют о заболевании туберкулезом, требуется срочное обращение к врачу-фтизиатру.

Следует учитывать, что туберкулиновая проба может дать положительный результат не только при заболевании, но и после иммунизации БЦЖ.

Реакция Манту не дает представления о распространенности или локализации процесса. Помимо этого, достаточно велико количество ложноположительных результатов:

  • при неправильном уходе за местом инъекции;
  • при индивидуальной реакции организма малыша на вещества, содержащиеся в пробе, кроме туберкулина;
  • при наличии массивной глистной инвазии.

ЧИТАЕМ ТАКЖЕ: прививка БЦЖ в 7 лет: фото положительной и отрицательной реакции

Суть и техника проведения анализа

Если Манту ребенку или взрослому проводить запрещается, в качестве диагностического метода используется ПЦР на туберкулез, анализ крови, флюорография. Анализ мочи на микобактерии туберкулеза помогает обнаружить возбудителей патологического процесса при их наличии, требуется для подтверждения или опровержения диагноза. Обнаружить палочку Коха возможно несколькими способами: бактериоскопическим, бактериологическим и посредством биологической пробы. Каждая из методик имеет преимущества и недостатки; выбор осуществлять должен специалист.

Бактериоскопический анализ мочи по Цилю-Нильсену

Поскольку бактерии погибают в среде с высокой кислотностью, для их обнаружения берутся реактивы, окрашивающие неустойчивые структуры. Первым делом для обесцвечивания применяется серная кислота. После используют раствор метиленового синего. Все структуры синеют; исключение составляют лишь приобретающие малиновый оттенок патогенные микроорганизмы.

Недостатками подобной методики являются затруднения с очищением мочи от посторонних примесей, которые могут становиться причиной искажения данных. Исследование покажет более точные результаты, если урина будет взята с использованием катетера.

Бактериологическое исследование

Такой способ представляет собой культивацию на питательной среде выпавшего осадка. Минусом методики является высокая длительность ожидания результатов. Сроки могут варьироваться в зависимости от выбранной среды: при выборе кровяной ожидание составляет примерно 1 неделю, для картофельной увеличивается до 1-1,5 месяцев.

Анализ по Нечипоренко

С помощью данного анализа можно выяснить, имеется ли в организме инфекционно-воспалительный процесс. Не всегда однако он показывает наличие палочек Коха при туберкулеза легких, ПЖ и других внутренних органов. По этой причине исследование дополняют другими. Анализ по Нечипоренко позволяет установить общую численность эритроцитов, лейкоцитов и белковых клеток в сданном образце биологической жидкости.

Биологическая проба

Считается самым достоверным методом. Осадок из мочи вводится в брюшную полость или подкожно животному (чаще крысе либо морской свинке). Затем за грызуном наблюдают на протяжении 1 месяца. Если человек болен, животное также будет заражено, вскоре погибнет. При этом будут наблюдаться очаги инфекции. Выяснить, заразилось ли животное, можно и раньше, сделав ему анализ крови или пункцию из лимфатических узлов. Такой способ применяется нечасто, поскольку часто у лаборатории отсутствует возможность к его проведению.

Расшифровка результатов

Расшифровать результат сможет только квалифицированный специалист. При этом учитывается возраст пациента. Ответ основывается на количестве имеющихся в пробе патогенных микроорганизмов.

Ответа может быть два:

  • положительный;
  • отрицательный.

Положительный значит, что в моче имеются МБК. Это повод либо пройти дополнительную диагностику (при необходимости), либо начинать лечение туберкулеза. У детей обычно бывают ложные результаты, поэтому назначают иные методы обследования, которые подтвердят диагноз.

При получении отрицательного ответа можно быть спокойным, инфицирования нет. При наличии симптоматики, которая говорит об обратном, обследование не заканчивается.

После того, как работник лаборатории расшифровал результат, бумага, на которой указывается ответ, направляется узкому специалисту, тому, кто давал направление на анализ. Фтизиатр изучает данный документ, на основе которого решает, что дальше делать.

Изучение мокроты человека

Слизь, выделяемая из легких, может быть проверена на наличие бактерий, вызывающих инфекцию. Для этого теста сначала собирается мокрота, образующаяся после кашля, и доставляется в больницу или кабинет врача.

В лабораторных условиях лаборант наносит образец на специальное стекло и добавляет специальный краситель, который позволяет увидеть микобактерии под микроскопом.

Также слизь добавляется в питательную среду для выращивания культуры микроорганизмов, чтобы их можно было достоверно определить как возбудителей туберкулеза и узнать, какие препараты будут наиболее эффективными при лечении болезни.

Поскольку бактерии, вызывающие туберкулез, растут медленно, процесс может занять несколько недель. Многие виды микробов туберкулеза устойчивы к одному или нескольким препаратам, используемых для терапии заболевания.

Если мокрота не образуется, но требуется получить образец, тогда вдыхают распыленный концентрированный солевой раствор, который взывает кашель и вытягивает жидкость в просвет бронхов. В качестве альтернативы можно использовать бронхоскопию или получить бактерии из желудка или других мест.

Дети с активным туберкулезом не выделяют мокроту. Для них может потребоваться принять решение о лечении, основанное на сборе и выращивании микробов у человека, заразившего ребенка.

www.nationaljewish.org

Диагностика туберкулеза по крови с помощью ИФА

После встречи человека с микобактерий туберкулеза, как и с любыми другими микроорганизмами, иммунная система начинает продуцировать особые белковые вещества — антитела, которые не допускают размножения микробов.

Так, после контактирования с микобактерий в организме вырабатываются специфические антитела различных классов — Ig A, Ig G, Ig M. Первыми в крови появляются именно Ig M, их обнаружение свидетельствует об остром инфекционном процессе. Позже появляются Ig G, однако они сохраняются в крови всю жизнь. Обнаружение Ig G является свидетельством того факта, что организм уже когда-то контактировал с определенным микроорганизмом.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) как раз и базируется на определении в кровяном русле антител к микобактериям туберкулеза. Тест на основе ИФА предполагает выявление антител класса Ig G, а также суммарных антител (Ig A+Ig G+Ig M). Чувствительность теста составляет около 86%. Приблизительно в 5-10% случаев возможны ложноположительные результаты.

Исследование венозной крови на туберкулез с помощью ИФА проводится частными лабораториями. После проведения исследования, полученные результаты вносятся в бланк. Возможны такие варианты результатов:

  • Антитела обнаружены;
  • Антитела не обнаружены;
  • Результаты сомнительны.

В случае если антитела к микобактериям туберкулеза были обнаружены — результат теста считают положительным. Это означает, что человек инфицирован туберкулезом

Однако важно помнить о том, что могут быть и ложноположительные результаты, вызванные недавней вакцинацией

Если в бланке исследования написано, что антитела не обнаружены — результат теста отрицательный. Подобное наблюдается в тех случаях, когда человек не инфицирован туберкулезом, либо инфекция в организме имеется, однако титр антител еще слишком низкий.

Важно

Если результаты теста отрицательны, однако у человека имеются симптомы туберкулеза — следует повторить исследование спустя несколько недель.

Что представляет из себя исследование ПЦР на туберкулезную инфекцию

Полимеразная цепная реакция ― это точнейшая молекулярно-генетическая диагностика. Анализ ПЦР при туберкулезном инфицировании позволяет с большой достоверностью выявить присутствие ДНК или РНК возбудителя в изучаемой пробе крови или иных биологических жидкостях организма.

Другие преимущества при ПЦР диагностике туберкулеза:

  • Безупречная точность полимеразной цепной реакции при анализе на туберкулезное заражение достигается за счет особенного фрагмента, относящегося к конкретному возбудителю, в данном случае микобактериям туберкулеза.
  • Гарантия стопроцентного результата благодаря чувствительности анализа ПЦР, которая составляет от десяти до тысячи клеток в исследуемом образце, в биологическом материале реально выявить даже единственную клетку туберкулезной микобактерии.
  • Самое срочное получение результатов обследования всего лишь в течение 3,5–5,5 часов с момента сдачи анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза.

Анализ ПЦР при туберкулезе несомненный прорыв в области постановки ранних и точных диагнозов. С момента появления молекулярно-генетического метода диагностики стало возможным обнаружить туберкулез и другие смертельно опасные инфекции на самой ранней стадии, спустя дни или максимум несколько недель после заражения. Когда возбудители только начинают атаку на организм, их еще можно уничтожить без последствий для органов и систем тела человека.

Микобактерии туберкулеза обладают характерной особенностью, значительно усложняющей излечение этого заболевания, ― способность приспосабливаться к медикаментозному воздействию некоторыми препаратами. Анализ ПЦР при туберкулезе дает возможность выяснить восприимчивость микобактерий туберкулеза к назначенному препарату и тем самым установить эффективность терапии. При проведении исследования ПЦР с целью определения устойчивости микобактерий туберкулеза к лекарственным препаратам используют способность генов возбудителя «запоминать» невосприимчивость к конкретному препарату. Результат исследования генов на устойчивость к лекарствам можно получить уже через два дня после сдачи анализа ПЦР.

Микобактерии туберкулеза

Бактерия африканского туберкулёза

Источником инфекции являются люди, пораженные туберкулезом. Микобактерии содержатся в мокроте. Она выходит из организма при кашле, чихании, сплевывании. Первое поражение развивается и завершается появлением признаков tuberculosis у 10% инфицированных. В остальных 90% иммунная защита начинает работать ярко, активно и препятствует патологии. Инфекция в этот период проходит в латентной (скрытой) форме, микобактерии не размножаются.

Антитела к Mycobacterium tuberculosis выявляются различными способами лабораторных исследований и позволяют своевременно начать лечение. Видов микобактерий более 70, из них 5 вызывают опасную патологию. Их объединяют в туберкулезный комплекс:

  • человеческий тип;
  • бычий;
  • африканский;
  • мышиный;
  • вакцинный штамм.

Человеческий тип вызывает основное количество форм и видов туберкулеза. По разным источникам цифра варьируется от 85 до 92%. Бычий становится причиной от 5 до 15% случаев. Африканский вид вызывает большинство случаев на Южноафриканском континенте, примерно 90%. Мышиный диагностируется крайне редко. Вакцинный штамм помогает проводить профилактику. Чаще всего болезнь поражает разные органы и системы человеческого организма:

  • 85% – легкие;
  • 15% – внелегочные.

Остальные проценты распределяются среди таких систем:

  • кости;
  • почки;
  • лимфоузлы;
  • мочеполовые;
  • ЦНС.

Внелегочные виды чаще обнаруживаются у больных ВИЧ инфекцией.

Зачем делать этот тест

Туберкулез – это очень заразное инфекционное заболевание. Передается оно воздушно-капельным путем и вызывается палочкой Коха. Эти микобактерии очень устойчивы, они сохраняются во внешней среде несколько месяцев, а при попадании в организм человека начинают постепенно размножаться. Чаще всего туберкулез локализуется в легких, но может поражать другие органы.

Опасность этой болезни в ее хроническом течении, причем на начальном этапе, часто ничем не проявляет себя. Эта инфекция очень заразна, больной может не подозревать, что инфицирован, но для окружающих он будет опасен. А лечить туберкулез очень сложно, так как бактерии устойчивы к внешним воздействиям.

Вылечить туберкулез легче всего в том случае, когда он диагностирован на начальном этапе

Поэтому так важно вовремя выявить эту болезнь. Во всем мире обязательно проводят профилактические обследования на туберкулез

Обычно диагностика у детей проводится с помощью туберкулиновой пробы – реакции Манту или диаскинтеста. Но не всегда эти исследования достоверны. Они не проводятся при обострении хронических заболеваний, при аллергических реакциях или кожных болезнях, а также при эпилепсии. После 14 лет и для взрослых основным методом выявления туберкулеза является флюорография грудной клетки. Если при этом обследовании выявлены какие-то отклонения или есть подозрение на инфицирование, врач назначает более тщательную диагностику.

Диагностика туберкулеза у детей чаще всего проводится с помощью реакции Манту

Это делается для того, чтобы вовремя начать лечение при выявлении инфекции, а также исключить риск заражения других людей, так как туберкулез очень заразен. Сдавать кровь рекомендуется при любом подозрении на эту болезнь, а также вместо проведения реакции Манту в том случае, когда к ней имеются противопоказания. Исследуется кровь также для контроля эффективности лечения при туберкулезе.

Альтернативные методы диагностики туберкулеза

Согласно федеральным клиническим рекомендациям Российского общества фтизиатров, с целью исключения туберкулеза у ребенка возможно использование альтернативных методов обследования. Заменить традиционные проверки могут следующие методики: Диаскинтест, Квантифероновый тест, Т-Спот исследование, обзорная рентгенография органов грудной клетки.

ЧИТАЕМ ТАКЖЕ: как проводится тест на Манту – Диаскинтест?

Анализы крови

Общеклинический анализ крови нельзя использовать вместо Манту. При заболевании туберкулезом в ОАК обнаруживается лейкоцитоз (увеличение количества лейкоцитов выше нормы), сдвиг лейкоцитарной формулы влево, увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

ЧИТАЕМ ТАКЖЕ: норма СОЭ в крови у детей по возрасту

Такие изменения не являются специфическими для туберкулеза, и происходят при любом воспалительном процессе в организме. Результаты биохимического анализа крови также будут без заметных изменений.

Исследование сыворотки крови способом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для скринингового обнаружения туберкулеза у детей не рекомендуется, поскольку выделить геномные фрагменты (части ДНК) возбудителей из крови возможно только при генерализованном туберкулезном процессе. Метод ПЦР пригоден для диагностических целей – выделения микобактерий туберкулеза в биологических образцах: мокроте, смывных водах бронхов, экссудате плевральной полости, спинномозговой и внутрисуставной жидкости. Использование ПЦР вместо проведения реакции Манту нецелесообразно.

ЧИТАЕМ ТАКЖЕ: через сколько дней можно начинать мочить Манту?

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) крови также не применяется при скрининге туберкулеза. Способ ИФА основан на обнаружении специфических антител в крови, а при туберкулезе действует другой патогенез иммунного ответа организма – антител в крови мало.

Анализ мочи

Анализ мочи также не является альтернативой туберкулиновым пробам, а лишь помогает в диагностике туберкулезного поражения мочевыводящей системы. В результатах исследования мочи можно обнаружить признаки амилоидных трансформаций только при внелегочных формах туберкулеза (изменения в почках, мочевом пузыре), а ПЦР мочи подтвердит диагноз.

Методика Диаскинтест

На сегодняшний день наибольшей восприимчивостью, избирательностью и минимальным аллергенным действием обладает проба с биопрепаратом «Диаскинтест». Он представляет собой аллерген туберкулезный рекомбинантный (АТР) и предназначается для внутридермального введения.

Методика инъекции и трактовка результатов аналогичны проведению пробы Манту, однако достоверность этого теста значительно выше. Тест считается положительным, если размер постинъекционной папулы превышает 3 мм. Крайне редко встречаются ложноположительные результаты при снижении у обследуемого общего иммунитета во время какого-либо сопутствующего заболевания.

ЧИТАЕМ ТАКЖЕ: фото нормы прививки Манту у ребенка

Внутрикожный тест с АТР является единственной заменой проведения реакции с туберкулином по закону.

Метод квантиферонового теста

Для проведения квантиферонового теста придется сдать кровь из вены. Способ QuantiFERON – TB Gold основан на иммуносорбентном анализе определения специфических антител, продуцируемых Т-лимфоцитами, с помощью меченых ферментов.

Квантифероновый метод обладает высокой чувствительностью. Крайне высокая стоимость этого анализа исключает возможность широкого применения.

Т-Спот исследование

Т-спот метод (T-SPOT.TB, спот-реакция) не менее информативен, чем квантифероновый анализ. Главным отличием является определение самих Т-лимфоцитов, которые продуцируют антитела в ответ на внедрение микобактерий. Это исследование позволяет проверить пациентов, подлежащих диагностике, из группы повышенной угрозы по возникновению туберкулезной инфекции (например, ВИЧ-инфицированных).

Рентген грудной клетки

ЧИТАЕМ ТАКЖЕ: где сделать рентген грудной клетки ребенку?

Согласно Приказу Министерства Здравоохранения РФ № 951 2014 года возможно проведение рентгенологического исследования (обзорной рентгенограммы грудной клетки) для исключения заболевания туберкулезом. Рентгенография или КТ органов грудины также является альтернативой внутрикожным пробам и может использоваться вместо Манту. Однако необходимо помнить, что при использовании рентгенологического обследования организм ребенка получает достаточно вредную лучевую нагрузку.

Процесс сбора анализов

Главным условием достоверности ПЦР диагностики является соблюдение правил сбора биологических жидкостей на анализ. Загрязненный или неправильно собранный материал может стать причиной неправильного результата. Наиболее распространенными являются анализ мокроты, крови и мочи, но для более глубокой дифференциальной диагностики можно брать пробы из содержимого желудка, синовиальной жидкости, спинномозговой жидкости, смывной жидкости бронхов, спермы, секрета простаты.

ПЦР мочи на туберкулез сдают утром после гигиены наружных половых органов путем мочеиспускания в стерильный контейнер

Во время процедуры важно не касаться внутренних стенок емкости, чтобы не допустить попадания сторонних микроорганизмов. Женщинам, которые живут регулярной половой жизнью обязательно нужно поставить тампон во влагалище, чтобы избежать попадания сторонних выделений

Анализ крови сдают утром натощак, а ПЦР мокроты на туберкулез может быть сделан в любое время суток с обязательной предварительной гигиеной полости рта. Это нужно чтобы удалить остатки пищи, которые могут попасть в контейнер

При отхаркивании мокроты важно не допустить попадания слюны и слизи из носоглотки в емкость, это может исказить данные анализа

Исследование содержимого желудка проводят в условиях стационара рано утром, пока мокрота, проглоченная за ночь, находится в желудке. Для обнаружения микобактерий туберкулеза таким методом делают трехкратный посев, который с большой вероятностью позволяет выделить палочку Коха.

Анализ крови на туберкулез – что показывает

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

  1. Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
  2. Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%);
  3. Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
  4. Повышение базофилов.

Лабораторный анализ на туберкулез не является специфичным ни для детей, ни для взрослых. Подобные изменения характерны для многих бактериальных или вирусных инфекций.

Показатели гемограммы предоставляют интерес для фтизиатров для определения стадии туберкулезного инфицирования.

При активной инфильтрации прослеживается лейкоцитоз вследствие увеличения количества нейтрофилов. В клетках появляется патологическая зернистость, что свидетельствует об интоксикации крови.

Очаги распада приводят к уменьшению числа эозинофилов, нейтрофилов, молодых форм, лимфоцитов. При диссеминации возникает абсолютный моноцитоз. На фоне рассасывания увеличивается число лимфоцитов и эозинофилов.

При уплотнении очагов гемограмма не характеризуется изменениями.

Анализы у детей на туберкулез: туберкулинодиагностика

Длительное время фтизиатры ставили реакцию Манту. Такие анализы на туберкулез позволяли выявлять не только активную инфекцию, но и инфицирование. Суть пробы заключалась в подкожном введении туберкулина – вещества, которое обуславливало аллергизацию организма. Для теста применялся материал, получаемый из Micobacterium Bovis. После подкожной инъекции получается папула, которая отражает реакцию организма на проникновения микобактерии:

  1. Нормальная папула – размер от 5 до 16 мм;
  2. При отсутствии реакции – ослабление иммунитета, отсутствие микобактерии;
  3. Большая папула – наличие антигенов бактерии, контактирование с носителем туберкулезной палочки.

Метод не считается надежным из-за большого количества ложноположительных реакций. При сомнительных результатах требовалось подтверждение пцр. С появлением диаскинтеста (дст) ситуация изменилась. Сочетанное использование способов позволяет получить более достоверные результаты.

Какой метод эффективнее?

Из вышеперечисленных при диагностике туберкулеза отдают предпочтение на взятие крови, мочи и мокроты. Кал не у всех выходит собрать в назначенное время.

Наиболее болезненный, считается анализ крови. Но, если речь идет о выяснении такого опасного заболевания, как туберкулез, то все иное отходит на задний план.

Что лучше подойдет детям?

Ребенку обычно назначают ПЦР слюны. Это менее безболезненно и травматично для психики. Также можно собрать мочу – это доступно и выполнимо в любой семье. Кал также сдают, но его бывает проблематично получить, особенно если малыш маленький.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей может дать ложный результат. После проведенного анализа желательно сделать и другие дополнительные мероприятия, которые остаточно подтвердят или опровергнут полученный результат.

ПЦР диагностика

Сегодня во многих клиниках можно пройти анализ крови на туберкулез вместо манту. Что это такое? Исследование называется ПЦР – полимеразная цепная реакция, оно является высокочувствительным. Это обусловлено тем, что с его помощью можно выявить даже 1-2 микробактерии возбудителя. Достоверность ПЦР очень высокая– в 98% происходит выявление патологических клеток. Поэтому ученые считают полимеразную цепную реакцию важным открытием в микробиологической науке за последнее время. ПЦР диагностика — это метод выбора Всемирной организации здравоохранения при туберкулезе.

Диагностика ПЦР на туберкулез эффективна и при контроле качества лечения, так как с помощью исследования врач может определить устойчивость бактерий к лекарствам

Устойчивость к лекарственным препаратам при лечении является очень серьезной проблемой, она снижает эффективность лечения в разы, поэтому так важно для врача-фтизиатра знать о ней у конкретного пациента. Это помогает правильно определить тактику лечения

Также анализ крови на туберкулез просто необходим для людей, которые уже перенесли это заболевание, для выявления рецидивов. Исследование дает возможность диагностировать рецидив на раннем этапе, что позволяет вовремя начать лечение и предупредить развитие серьезных осложнений. Свою эффективность анализ на туберкулез доказал и в тех случаях, когда его локализация внелегочная.

К анализу крови ПЦР, так же как и к иммуноферментному исследованию не нужны особые подготовки. Иногда требуется перед исследованием отменить на некоторое время прием определенных лекарств. Об этом предупредит лечащий врач, который и направит на исследование.

Никаких возрастных ограничений для проведения исследования на микробактерии туберкулеза нет. Анализ крови ПЦР делают взрослым и детям. Так как он абсолютно безопасен. Но все же в школах и садиках чаще детям делают пробу Манту, а ПРЦ диагностику больше используют для взрослых людей. Особенно для тех, у кого ранее был туберкулез.

Проведение исследование ПЦР

Сдать свою кровь на туберкулез можно в специализированной лаборатории. Кровь при анализе на туберкулез собирается в пробирку с веществом, которое не дает ей сворачиваться

Важно соблюдать все условия стерильности, а также запрещено взбалтывать пробирки с кровью на туберкулез при анализе, так как будет затруднен процесс отделения ее клеток от плазмы

Далее происходит лабораторный процесс, при котором отделяется плазма от клеток, и лаборант через микроскоп определяет есть ли клетки возбудителя в биологическом материале. Заключительный этап исследования основывается на создании определенных условий для клеток. То есть в осадочный материал добавляются вещества, которые спровоцируют реакцию, также при этом должны быть определенные температурные показатели. Таким веществом является фермент транскриптаза. В результате этих действий получается обновленный материал ДНК, который должен расшифровываться специалистом. После этих действий лаборант может дать точное заключение о наличии или отсутствии туберкулеза у человека.

Биологическим материалом для приведения анализа ПЦР может быть, как кровь, так и моча. Для проведения анализа мочи на ПЦР необходима утренняя порция в количестве 20-30 мл. Для проведения исследования крови потребуется 1 мл венозной крови.

Расшифровка

Расшифровки анализов ПЦР можно получить в довольно короткий срок – 1-2 дня. А в некоторых случаях его проводят всего за 4-5 часов. Это уместно если результаты нужны срочно, перед экстренной операцией и т.д.

ПЦР расшифровка может быть простой и сложной. В первом случае результат будет отрицательным и никаких патологических клеток обнаружено не будет, или же их будет очень мало. Сложная ПЦР расшифровка нужна при высоком содержании клеток, так как при этом необходимы точные расчеты. Есть определенные нормы, по которым квалифицированный специалист расшифровывает анализ крови на туберкулез. При этом он может диагностировать стадию и причины заболевания.

ПЦР на туберкулез

Для исследования меразной реакции можно использовать любые биологические жидкости (в частности, мокроту, кровь, мочу, спинномозговую жидкость и т.д.).

Обычно туберкулез распространяется по организму по лимфатическим сосудам (лимфогенный тип распространения). В крови он появляется чаще всего при диссеминации его по организму. Кроме того, появление микобактерий в крови может свидетельствовать о наличии распада в легком с вовлечением сосудов. При этом микобактерия попадает в общий кровоток и часто служит причиной поражения и других органов.

Чаще всего для постановки диагноза туберкулеза достаточно выявления в исследуемом материале не менее 10 микроорганизмов (однако не все микобактерии отвечают за развитие туберкулеза, т.е. не являются патогенными).

Для того чтобы правильно провести данное исследование, следует соблюдать некоторые меры. В первую очередь забор биологического материала должен проводиться в стерильных условиях, чтобы избежать возможности попадания других микроорганизмов и неправильной интерпретации анализа

Особое внимание следует уделить личной безопасности, так как высок риск попадания забранного биоматериала на свое тело (особенно если есть ранки на руках, заусенцы) или в дыхательные пути, что существенно повышает риск заражения

Забранная кровь помещается в пробирку с предварительно добавленным туда ЭДТА (вещество, препятствующее преждевременному сворачиванию крови и образованию кровяного сгустка). Это необходимо для нормального определения компонентов крови, для лучшей визуализации микобактерий. После забора крови ее желательно не встряхивать, так как это вызывает повреждение эритроцитов.

Полученную кровь центрифугируют, чтобы отделить клеточный осадок от плазмы. Данный осадок после изучается под микроскопом. Если в полученном анализе удается визуально определить наличие микобактерий, необходимость в проведении ПЦР уменьшается, однако провести ее все же следует.

После этого к полученному осадку добавляют некоторые ферменты, в частности, транскриптазу. В определенных условиях (необходима температура окружающей среды не менее 38°) происходит реакция достраивания цепей ДНК, в результате чего в растворе образуется несколько фрагментированных участков генетического материала. По наличию их и их количества судят о присутствии заболевания.

Иногда результат может оказываться ложным

О ложноотрицательном результате можно говорить в том случае, когда анализ для исследования был взят неправильно либо не были соблюдены необходимые условия и меры предосторожности для данной операции. Ложноположительный результат обычно выявляется, когда были загрязнены приборы и посуда для взятия анализа (шприцы, иглы, пробирки)

Преимущества

У рассматриваемого метода масса плюсов, к ним относится:

  1. Высокая специфичность и чувствительность. Выявляется только возбудитель туберкулеза. Ложного ответа быть не может, если учтены все нюансы проведения процедуры. Микобактерии обнаруживаются даже тогда, когда их минимальное количество. Даже если в собранном материале 10 патологических клеток, инфекция будет выявлена.
  2. Быстрота получения ответа. Сколько делается анализ? Уже через 3-5 часов можно получить результат. Тут не нужно делать посев мокроты на туберкулез, и это сужает сроки.
  3. Выявить можно как скрытую инфекцию, так и ту, которая находится в острой форме.
  4. Нет абсолютных противопоказаний. Это дает возможность проводить процедуру всем без исключения (даже маленьким детям) и особенно тогда, когда другие методы неразрешены.
  5. При помощи ПЦР-диагностики изучается различный биоматериал (урина, кал, кровь, слюна, спинномозговая жидкость и др.).
  6. Метод выявляет туберкулез и на ранних стадиях, в первые часы после заражения.

Способы выявления туберкулезной инфекции

Чтобы поставить точный диагноз, врачи используют различные методики обследования. Чаще специалисты используют следующие методы инструментальной и лабораторной диагностики туберкулеза:

  • туберкулинодиагностика (тест Манту);
  • микроскопическое исследование мокроты;
  • анализ крови на туберкулез;
  • анализ мочи;
  • эндоскопия;
  • рентгенологические исследования.

Туберкулинодиагностика (раннее выявление туберкулез: этот метод позволяет определить чувствительность организма к микобактерии туберкулеза или вакцине БЦЖ. Область средней трети предплечья обрабатывают этиловым спиртом. Под кожу, параллельно ее поверхности, вводят иглу срезом вверх (в шприце 0,1 мл туберкулина). На месте введения препарата образуется небольшой пузырек (7-8 мм в диаметре).

Через 72 часа проводят осмотр места введения туберкулина на наличие покраснений и скопление инфильтрата. Измеряют диаметр реакции прозрачной линейкой. Этот метод ранней диагностики используют для выявления реакции у детей.

Туберкулин — водно-глицериновый экстракт, который добывают из культуры возбудителя болезни. Вводить туберкулин должна специально обученная медсестра. В противном случае можно получить недостоверный результат. Определение (расшифровка) ответной реакции (диаметр инфильтрата):

  • 5 мм и более (положительная);
  • 0-1 мм, отсутствие покраснения (отрицательная);
  • 2-4 мм, небольшое покраснение (сомнительная).

Положительные реакции (в зависимости от диаметра инфильтрата):

  • 5-9 мм (слабовыраженная);
  • 10-14 мм (средневыраженная);
  • 15-16 мм (выраженная);
  • не менее 17 мм у взрослых, не менее 21 мм у детей, везикуло-некротические реакции (гиперергическая);
  • увеличение на 6 мм и более в сравнении с предыдущей пробой (усиливающаяся).

Микроскопическое исследование мокроты (раннее выявление туберкулеза): сбор мокроты проводят в лаборатории. Слизь из гортани (выделяется при кашле и отхаркивании мокроты) собирают с помощью тампона, помещают его в герметичную стерильную емкость, отправляют в лабораторию.

Дополнительные методы

В домашних условиях забор материала не производят. Подобная процедура должна проводиться в стерильном помещении. После обработки кислотными растворами микобактерии сохраняют окраску. Они видны под микроскопом среди окрашенных мазков мокроты. Кроме классической микроскопии используют флуоресцентную методику (проводится при помощи УФ-лучей).

Общий анализ крови: уровень эритроцитов и гемоглобина (не меняется). Поэтому анализ крови при туберкулезе сдают для определения СОЭ. Повышение этого показателя может свидетельствовать о начале заболевания или об обострении хронической формы.

Врач может направить пациента сдать кровь на антитела к туберкулезу и для проведения ИФА (иммуноферментного анализа). Анализ мочи: исследование эффективно, если микобактерии поразили мочевыводящие пути и почки. При локализации инфекции в легких, показатели анализа останутся в норме.

Эндоскопия: есть несколько вариантов подобного исследования — бронхоскопический лаваж, трахеобронхоскопия, трансбронхиальная биопсия, плевральная пункция, торакоскопия, пункционная биопсия плевры и трансторакальная игловая биопсия. ПЦР диагностика: полимеразная цепная реакция. В лаборатории проводят ПЦР на туберкулез. Метод позволяет обнаружить и распознать бактерии в собранном материале.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *